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保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.试剂瓶开盖后各组分按要求条件保存；
2.拆封后请尽快使用完！
2.拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪/荧光分光光度计
适用样本
重组酶/细胞/组织
产品特点
荧光酶标仪/荧光分光光度计
仪器准备
1. 荧光酶标仪/荧光分光光度计
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
使用注意事项
1. 如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 ug每样。
2. 如果样品中激活的HAT水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个HAT激活比较强的时间点进行检测。
3. HAT底物避光保存，使用过程中尽量避光。
4. 底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
6. 荧光酶标仪检测必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
7. 样品含游离巯基（如 DTT、TCEP、β-巯基乙醇、Cys等）会致假阳性，需提前处理。
8. 如果酶液必须含DTT才能稳定，建议在实验前用脱盐柱将酶置换到不含DTT的缓冲液中。
9. 细胞/组织样本最好用分离得到的细胞核进行裂解。
10. 总蛋白总量尽可能高一些，尽量不少于100 μg。
2. 如果样品中激活的HAT水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个HAT激活比较强的时间点进行检测。
3. HAT底物避光保存，使用过程中尽量避光。
4. 底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
6. 荧光酶标仪检测必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
7. 样品含游离巯基（如 DTT、TCEP、β-巯基乙醇、Cys等）会致假阳性，需提前处理。
8. 如果酶液必须含DTT才能稳定，建议在实验前用脱盐柱将酶置换到不含DTT的缓冲液中。
9. 细胞/组织样本最好用分离得到的细胞核进行裂解。
10. 总蛋白总量尽可能高一些，尽量不少于100 μg。
使用方法
样品处理
A． 酶液体样本：直接检测
B． 细胞样品（仅供参考）
1. 收集细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50 μl冷的细胞裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
C． 组织样品（仅供参考）
1. 取适量组织样本剪碎，按照每50 mg/100 μl冷的细胞裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
试剂配制
根据待测样品数，用预热的检测缓冲液将S99探针20倍稀释，充分混匀。配制成S99探针工作液。
HAT活性检测
按要求在黑色96孔板中添加相应的试剂；
1. 在30–37℃ 避光孵育 60 min。
2. 再加入10 μl S99探针工作液荧光底物，充分混匀，在37℃下避光反应15分钟。
3. 荧光酶标仪检测荧光强度。
激发波长（Ex）=380 nm，发射波长（Em）=470 nm。
4. 根据待测细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的HAT 活性程度变化。
酶活性计算
酶活性 = F / C样本
F：荧光强度（RFU）
C样本：样本蛋白浓度，mg/ml；或细胞数
A． 酶液体样本：直接检测
B． 细胞样品（仅供参考）
1. 收集细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50 μl冷的细胞裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
C． 组织样品（仅供参考）
1. 取适量组织样本剪碎，按照每50 mg/100 μl冷的细胞裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
试剂配制
根据待测样品数，用预热的检测缓冲液将S99探针20倍稀释，充分混匀。配制成S99探针工作液。
HAT活性检测
按要求在黑色96孔板中添加相应的试剂；
1. 在30–37℃ 避光孵育 60 min。
2. 再加入10 μl S99探针工作液荧光底物，充分混匀，在37℃下避光反应15分钟。
3. 荧光酶标仪检测荧光强度。
激发波长（Ex）=380 nm，发射波长（Em）=470 nm。
4. 根据待测细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的HAT 活性程度变化。
酶活性计算
酶活性 = F / C样本
F：荧光强度（RFU）
C样本：样本蛋白浓度，mg/ml；或细胞数
常见问题分析
荧光强度值偏低？
HAT活性检测方法常见的问题主要为测得的荧光强度值偏低，趋势不明显，无结果，无法显示与对照组细胞的差异等，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1. 样品上样量不够：
2. 样本不新鲜：
3. 样品裂解不够充分：
4. 样品上样量不够：
HAT活性检测方法常见的问题主要为测得的荧光强度值偏低，趋势不明显，无结果，无法显示与对照组细胞的差异等，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1. 样品上样量不够：
2. 样本不新鲜：
3. 样品裂解不够充分：
4. 样品上样量不够：
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