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产品概述
product description
贝博 BBcellProbe®Green Fluorescent FAM-FLICA Caspase-I检测试剂盒是采用绿色荧光标记的Caspases-1底物焦亡探针检测Caspase-1蛋白酶的活化情况。
贝博BBcellProbe®Caspase-[焦亡探针是细胞渗透性、非细胞毒性的Caspases-l荧光标记底物，底物可以与活化的casepase1酶不可逆地结合，并在细胞内保留绿色荧光信号。未结合的荧光底物会在后续洗涤步骤中扩散出细胞。
保存温度
2-8℃避光
有效期
6个月
适用样本
细胞
产品应用
荧光酶标仪/荧光光度计/激光共聚焦显微镜/流式细胞仪
仪器准备
1.荧光酶标仪/荧光光度计/激光共聚焦显微镜/流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.HBSS
3.纯水
2.HBSS
3.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底细胞培养板
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底细胞培养板
使用注意事项
1.如果样品中激活的焦亡水平很低，适当调节诱导细胞焦亡的时间，找一个焦亡激活比较强的时间点进行检测。
2.焦亡试剂避光保存，使用过程中尽量避光。
2.焦亡试剂避光保存，使用过程中尽量避光。
使用方法
试剂配制：
探针染色工作液的配制：
根据样本数量，用检测缓冲液B将探针A进行10倍稀释，然后用HBSS将10倍稀释的探针A再次进行50倍稀释，总计500倍稀释，配制成探针A染色工作液。
细胞样本检测：
探针A标记：
原位标记：仅用于贴壁细胞
1．培养板/培养皿准备细胞样本。
2.待细胞生长到合适丰度，去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3加入适量体积37C预热的焦亡探针工作液A。
4.在37°C细胞培养箱内于生长状态下避光孵育60分钟~180分钟（具体孵育时
间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
5.“移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。以充分去除未结合的探针。
6. 加入200μLHBSS缓冲液。
7.荧光酶标仪、荧光显微镜（含合适滤片）检测荧光强度。
最大激发/发射波长为488 nm/526 nm。
根据焦亡的细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的Caspase1活性程度变化。
收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1．离心，吸除上清培养基。
2. 用PBS洗细胞一次。
3.细胞收集后重悬浮于稀释好的37C预热的探针A工作液中。
4.，于生长状态下37°C细胞培养箱内避光孵育60-180分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
5.离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。以充分去除未进入细胞内的探针。
6.用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
7.用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测荧光强度。最大激发/发射波长为488 nm/526nm。
探针染色工作液的配制：
根据样本数量，用检测缓冲液B将探针A进行10倍稀释，然后用HBSS将10倍稀释的探针A再次进行50倍稀释，总计500倍稀释，配制成探针A染色工作液。
细胞样本检测：
探针A标记：
原位标记：仅用于贴壁细胞
1．培养板/培养皿准备细胞样本。
2.待细胞生长到合适丰度，去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3加入适量体积37C预热的焦亡探针工作液A。
4.在37°C细胞培养箱内于生长状态下避光孵育60分钟~180分钟（具体孵育时
间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
5.“移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。以充分去除未结合的探针。
6. 加入200μLHBSS缓冲液。
7.荧光酶标仪、荧光显微镜（含合适滤片）检测荧光强度。
最大激发/发射波长为488 nm/526 nm。
根据焦亡的细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的Caspase1活性程度变化。
收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1．离心，吸除上清培养基。
2. 用PBS洗细胞一次。
3.细胞收集后重悬浮于稀释好的37C预热的探针A工作液中。
4.，于生长状态下37°C细胞培养箱内避光孵育60-180分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
5.离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。以充分去除未进入细胞内的探针。
6.用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
7.用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测荧光强度。最大激发/发射波长为488 nm/526nm。
常见问题分析
caspase-1活性检测方法常见的问题主要为测得的荧光强度值偏低，趋势不明显，无结果，无法显示与对照组细胞的差异等，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1.样本丢失：焦亡细胞粘附性改变，可能在换液、洗涤等过程中丢掉漂浮的或者粘附性较差的细胞。注意细胞操作时动作轻柔，避免丢掉阳性细胞。洗涤换液等操作最好使用培养板离心机操作，没有培养板离心机时可以将漂浮细胞用离心管离心收集加回。
1.样本丢失：焦亡细胞粘附性改变，可能在换液、洗涤等过程中丢掉漂浮的或者粘附性较差的细胞。注意细胞操作时动作轻柔，避免丢掉阳性细胞。洗涤换液等操作最好使用培养板离心机操作，没有培养板离心机时可以将漂浮细胞用离心管离心收集加回。
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