-20℃避光

1.开盖后组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！

6个月

酶标仪

细胞/组织

1. 酶标仪
2. 匀浆机/匀浆器
3. 水浴锅/恒温箱
4. 电子天平
5. 剪刀
6. 离心机
7. 移液器
8. 冰箱
9. 冰盒

1. 生理盐水或PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套

1. 试剂盒仅科研使用；试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
2. 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
3. 试剂A如不经常使用，应充分溶解后分装-20℃保存，可4℃短期保存。
4. 本法可直接用于检测脑脊液中的FC含量，但不能直接检测尿液中的FC含量，因为未经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。
5. 检测FC的血清或血浆宜用EDTA或肝素抗凝，如不能及时测定，密闭保存，4°C可稳定1周，-20℃可以稳定半年以上。
6. 本法线性范围可达13mmol/L，如果样本FC浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
7. 该试剂盒既可作终点法检测，又可作速率法检测。
8. 本法不适于检测总胆固醇的浓度，如需检测总胆固醇（TC)含量，请选择相关产品。

样品处理
血清、血浆、脑脊液样本：
从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测；
如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。

细胞样本：
①.取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
②用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
③.加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，
间隔30s，重复3~5次，亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；亦可用1~2% Triton X-100
冰浴30~60min，制备好的裂解液不可离心。

组织样本：
准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例混合，在冰浴条件下手
动或机械匀浆，2500~3000g离心10min，取上清。

测定方法：
酶标仪FC测定操作:
1. 按下表依次加入试剂：
2. 充分混匀, 37℃水浴中孵育5分钟。
3. 酶标仪测定500~520 nm吸光度。以空白孔调零，读取标准孔和各样品孔的吸光度。

计算：

血清、血浆等液体样本(空白调零)：
FC(mmol/L)= A样品/A标准×5

组织样本(空白调零)：
按样本质量算：
FC(mmol/g)= A样品/A标准×5×V2/(m×1000)

按蛋白浓度算：
FC(mmol/g pr)= A样品/A标准×5×V2/(Cpr×V2)
= A样品/A标准×5/Cpr

细胞样本(空白调零)：
按细胞数量算：
FC(mmol/L)= A样品/A标准×5×V2/N

式中：
m=组织样本取样质量（g）
V1=细胞样本取样量（ml）
V2=样本匀浆液总体积（ml）
Cpr=样本蛋白浓度（g/L）
N=细胞数量（以万计）

参考区间：
【FC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl】
健康成年人理想范围：<1.7mmol/L(<67mg/dl)