2-8℃

1.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！

6个月

酶标仪

血清/血浆/细胞/组织

酶标仪

1. 酶标仪
2. 水浴锅
3. 离心机
4. 研钵
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
8. 涡旋混匀器

1. 纯水
2. 蛋白定量试剂盒
3. 生理盐水/PBS

1. 96孔板
2. 吸头
3. 一次性手套

1.注意配制好的试剂的保存条件及时间；
2.试剂盒拆封后，请在有效期内尽快使用；

一、试剂配制
1．试剂C的配制：
使用前每支粉剂C1加1瓶稀释液C2，充分溶解。

2．试剂D的配制：
使用前每支粉剂D1加1瓶稀释液D2，充分溶解。
3．试剂E的配制：
使用前每支粉剂E1加1瓶稀释液E2，充分溶解。
4．10mmol/L标准品储备液的配制：
使用前先将一支谷氨酸标准品粉剂加5mL标准品稀释液加热（可煮沸）溶解，配成10mmol/L谷氨酸标准储备液。

5．200μmol/L 标准品工作液的配制：
测定前取标准品储备液10μL加标准品稀释液0.49mL，配成200μmol/L谷氨酸标准工作液。

6．反应工作液的配制：
按试剂B：试剂C：试剂D：纯水＝100:10:1:39的比例进行配制，用多少配多少，现配现用。

二、样本的前处理：
1. 动物组织样本的前处理：
准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液（即10%的匀浆上清液），用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白浓度。
取10%的匀浆上清液0.05mL加0.15mL的试剂A (按1：3比例)，充分混匀，3000～3500转/分，离心10分钟，取上清待测。

2. 植物组织样本的前处理：
（1）方法一
先将植物组织用PBS擦洗干净，再用吸水纸吸干，后剪碎放入研钵中，液氮研磨成粉，称取植物粉末，按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的PBS，涡旋震荡（或研磨仪研磨）1分钟，4000转/分,离心10分钟,取匀浆上清液0.2mL加0.6mL的试剂A (按1：3比例)，充分混匀，3000～3500转/分，离心10分钟，取上清待测；
（2）方法二
在洗净并擦干水分后，直接称重，按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的PBS，冰水浴条件下机械匀浆,4000转/分,离心10分钟,取上清液0.05mL加0.15mL的试剂A (按1：3比例)，充分混匀，3000～3500转/分，离心10分钟，取上清0.5mL待测。


3．细胞样本：
⑴ 收集细胞后，每份细胞（细胞数量尽量不要低于106个，越多越好）加入0.3mL的生理盐水（或者PBS）；
⑵ 冰水浴下超声破碎（功率200-300W，运行5秒，间隔15秒，反复3-5次），4000转/分离心10分钟；
⑶ 取上清液（上清液需要测定其蛋白浓度）0.05mL加0.15mL的试剂A (按1：3比例)，充分混匀，3000～3500转/分，离心10分钟，取上清0.05mL待测。

4. 血清（浆）等液体样本：
取0.05mL的血清（浆）加0.15mL的试剂A (按1：3比例)，充分混匀，3000～3500转/分，离心10分钟，取上清待测。


二、 操作步骤：
1. 酶促反应：


3．计算：
（1）血清（浆）等液体样本计算公式

（2）动物组织（或细胞）的计算公式

（3）植物组织的计算公式


（4）细胞样本的计算公式

上述公式中：
C标准：标准品浓度, 200μmol/L;
4：样本前处理(加试剂A)稀释倍数；
Cpr：匀浆蛋白浓度，gprot/L（prot指蛋白）；
W：组织重量，g；
V样总：样本匀浆时的匀浆液总体积（约等于加入的匀浆介质的总体积），L；
细胞总数：收集好用于破碎的细胞的总数量，万个。